Nuair a theipeann ar thurgnamh, ar chuir tú méar in iúl riamh ar imoibrithe costasacha nó ar uirlisí casta? Ach uaireanta, d'fhéadfadh an fíor-"culprit" a bheith i bhfolach go ciúin sa chúinne - gur cosúil go gnáth buidéal imoibrí maoláin. Cé go bhfuil sé neamhfheiceálach, is é an bealach tarrthála é chun cruinneas an turgnaimh a choinneáil. Inniu, nochtfaimid rún an "chaomhnóra dofheicthe" seo.
Ⅰ. Maolán: Cad é? Cén fáth go bhfuil sé fíor-riachtanach sa tsaotharlann?
Go simplí, is córas réitigh speisialta é maolán a fhéadfaidh seasamh in aghaidh na n-éifeachtaí a bhaineann le méid beag aigéad breise, alcaile nó caolaithe agus luach pH réasúnta cobhsaí an tuaslagáin a chothabháil. De ghnáth bíonn sé comhdhéanta de phéire "comhpháirtithe" - aigéad lag agus a bhonn comhchuingeach (nó bonn lag agus a aigéad comhchuingeach), mar aigéad aicéiteach/aicéatáit sóidiam (HAc/Ac-), fosfáit dé-hidrigine sóidiam/fosfáit hidrigine déshóidiam (NaH₂PO₄/Na₂HPO₄), i saotharlanna coitianta etc.
Cumas lárnach: Cobhsaigh pH agus cuir i gcoinne athruithe!
Nuair a thugtar méid beag de shubstaintí aigéadacha nó alcaileach isteach sa turgnamh de thaisme, imoibríonn an "comhpháirtí" sa mhaolán go tapa, cosúil le "geata ian hidrigine" éifeachtach, é a ionsú nó a scaoileadh, rud a sheachnóidh luaineachtaí suntasacha i luach pH an tuaslagáin. Tá an cumas seo riachtanach do go leor imoibrithe bithcheimiceacha atá ag brath ar thimpeallacht pH ar leith.
Ⅱ. Céim na saotharlainne: príomhcharachtar fíor-riachtanach agus ról tacaíochta
1. "Córas tacaíochta beatha" de thurgnaimh bhithcheimiceacha:
Taighde ar ghníomhaíocht einsímí:Níl gníomhaíocht optamach ag formhór na n-einsímí ach laistigh de raon cúng pH. Soláthraíonn maoláin (amhail Tris-HCl, PBS) “binse oibre” cobhsaí d’imoibrithe einsíme chun torthaí iontaofa a chinntiú.
Íonú próitéin agus anailís:Ó lysis cille, scaradh crómatagrafach (malartú ian, crómatagrafaíocht cleamhnais) go leictreafóiréis (cosúil le SDS-PAGE), criostalú agus stóráil próitéin, éilíonn gach céim maolán le pH ar leith chun struchtúr, muirear agus tuaslagthacht an phróitéin a choinneáil agus dínádúrú nó deascadh a chosc.
Ionramháil aigéid núicléacha:Tá imoibriú PCR, eastóscadh DNA/RNA, díleá einsímí, ligation, hibridiú agus próisis eile thar a bheith íogair do pH. Is féidir le maoláin a úsáidtear go coitianta ar nós TE (Tris-EDTA) struchtúr aigéid núicléacha a chobhsú agus iad a chosaint ó dhíghrádú núicléas.
2. "Suantán" de chultúr na gceall:Is córas maolánach casta é meán saothraithe cille (amhail DMEM, RPMI) féin (go minic ag brath ar chóras décharbónáite sóidiam/dé-ocsaíd charbóin). Má chuirtear maoláin bhreise (cosúil le HEPES) leis, féadann sé timpeallacht pH níos cobhsaí a sholáthar do chealla, go háirithe nuair a bhíonn leachtanna á n-athrú, ag breathnú nó nuair a d’fhéadfadh tiúchan dé-ocsaíd charbóin luainiú, chun fás cille sláintiúil a chinntiú.
3. "Fórsa cobhsaíochta" na ceimice anailíseach:
Scaradh crómatagrafach:I gcrómatagrafaíocht leacht ardfheidhmíochta (HPLC) agus crómatagrafaíocht ian (IC), is é pH na céime soghluaiste an príomh-pharaiméadar rialaithe don éifeacht scaradh, agus cinntíonn maoláin (cosúil le fosfáití agus aicéatáití) in-atáirgtheacht an phróisis scaradh.
Anailís toirtmheasctha:Ní mór roinnt imoibrithe toirtmheasctha a dhéanamh ag pH tairiseach nó cuir in iúl an pointe deiridh nuair a shroichtear pH ar leith, agus tá ról cobhsaíochta ag an maolán.
Réitigh chaighdeánacha a ullmhú:Is gá luach pH go leor réitigh chaighdeánacha a rialú go beacht, agus tá maoláin mar bhunús.
Ⅲ. Roghnú agus úsáid: a lán eolais
Roghnaigh an córas maoláin ceart:
Tá luach pKa ríthábhachtach:Is gnách go mbíonn raon maoláin éifeachtach maoláin laistigh de raon a luach pKa ± 1. Bí cinnte maolán a roghnú le luach pKa gar don pH oibre atá uait! Mar shampla, is minic a úsáidtear fosfáit (pKa ~ 7.2) sa raon pH neodrach, agus is minic a úsáidtear Tris (pKa ~ 8.1) in alcaileach.
Comhoiriúnacht:Smaoinigh an gcuireann na comhpháirteanna maoláin isteach ar d’imoibriú turgnamhach (m.sh. d’fhéadfadh fosfáit cur isteach ar roinnt staidéar fosfarylation, agus féadfaidh bóráit imoibriú le siúcraí).
Neart agus teocht ianach:Bíonn tionchar ag neart ianach ar ghníomhaíocht einsím, tuaslagthacht, etc.; is féidir le hathruithe teochta cur isteach go mór ar luach pKa maoláin ar nós Tris (tá comhéifeacht teochta pKa mór de thart ar -0.031/ céim ag Tris).
Ⅳ. Liosta Maoláin Choiteann
1. Sraith maolánach PBS
Maolán PBS 1 × (pH7.4), maolán PBS 10 × (pH7.4), púdar fosfáit PBS (gan iain chailciam agus maignéisiam): cealla a ní i dturgnaimh chultúir cille (mar shampla sula n-athraítear an meán cultúir); antasubstaintí a chaolú agus plátaí ELISA a ní i dturgnaimh imdhíoneolaíochta; brú osmotic agus cobhsaíocht pH a chothabháil i dturgnaimh phróitéin/aigéad núicléach, etc.
Maolán DPBS (gan cailciam agus maignéisiam), púdar fosfáit DPBS (gan ions cailciam agus maignéisiam): cítoiméadracht sreabhadh i dturgnaimh cille, níocháin tar éis díleá cille (chun cailciam agus maignéisiam a sheachaint ag cur isteach ar ghníomhaíocht einsím); einsímí a chaolú nó turgnaimh íogaire ian a dhéanamh sa bhitheolaíocht mhóilíneach (amhail imoibrithe PCR áirithe), etc.
Maolán PBST (1 ×), maolán PBST (10 ×): a úsáidtear le haghaidh céimeanna blocála agus níocháin i Western Blot nó imdhíon-histochemistry, ag laghdú ceangailteach neamhshonrach, etc.
2. Sraith maolán TBS
Maolán TBS (1 ×), maolán TBS (10 ×): maolán PBS a athsholáthar i dturgnaimh imdhíoneolaíochta (chun cur isteach fosfáite ar cheangal antashubstainte áirithe a sheachaint); timpeallacht pH alcaileach a chobhsú i dturgnaimh próitéin, etc.
3. Sraith maoláin HBSS
Maolán HBSS (saor ó chailciam agus maignéisiam, saor ó fheanól dearg)/maolán Hank (saor ó chailciam agus maignéisiam): scaradh cille agus níocháin lártheifeacha i dturgnaimh cille (amhail cíteaiméadracht sreafa); Cothabháil gearrthéarmach cille (amhail íomháú cille beo), srl. turgnaimh imirce/ionradh cille.
4. Sraith maoláin TE
Maolán TE (1×), maolán TE (10×): DNA/RNA a thuaslagadh agus a stóráil (Coimeádann Tris an pH, déanann EDTA iain mhiotail a chealú chun gníomhaíocht núicléas a chosc); DNA caolaithe le haghaidh PCR, seicheamhú agus turgnaimh eile.
5. Sraith maolán leictreafóiréis
Maolán TAE (1 ×): leictreafóiréis glóthach agarose traidisiúnta DNA (taifeach íseal, oiriúnach do blúirí DNA móra). Maolán TBE (1×), maolán TBE (10×): leictreafóiréis DNA/RNA ardtaifigh (amhail blúirí beaga nó leictreafóiréis glóthach polyacrylamide); leictreafóiréis fadtéarmach (tá an acmhainn mhaoláin níos fearr ná TAE).
6. Sraith Maolán Turgnaimh Western Blot
Maolán Aistrithe Blot an Iarthair (10 ×): Maolán a úsáidtear chun próitéiní a aistriú ó fhoirmiú go membrane (cosúil le membrane PVDF), ina bhfuil Tris, glicín agus meatánól.
Tris{0}}maolán HCl (1mol/L, pH6.8): Glóthach tiubhaithe SDS a ullmhú-PAGE, etc.
Tris-maolán HCl (1.5mol/L, pH8.8): Glóthach deighilte SDS a ullmhú-PAGE, etc.
7. Sraith maolánach pH caighdeánach
pH=4.00/6.86/9.18 maolán (ullmhaithe 250mL): tuaslagán caighdeánach chun méadair pH a chalabrú (m.sh. tá pH6.86 caighdeánach neodrach, is caighdeáin aigéadach agus alcaileach iad pH4.00 agus 9.18).
Ní ról bunúsach tacaíochta ar bith sa tsaotharlann iad imoibrithe maolánacha. Luíonn a gcroíluach timpeallacht prótóin bheacht agus chobhsaí a sholáthar, arb é an bhunchloch é chun an ráta cothromaíochta teirmidinimice agus cinéiteach d'fhormhór na n-imoibrithe bithcheimiceacha a chothabháil. Ó rialáil microcomhshaoil ar shuímh einsímí gníomhacha, go dtí cobhsaíocht chomhfhoirmiúil bithmhóilíní a ráthú, go dtí cothabháil grádáin ian trasmembrane, tá cumas maolaithe pH an chórais mhaoláin ina réamhriachtanas fíor-riachtanach le haghaidh in-atrialltacht agus iontaofacht sonraí turgnamhacha. Tionlacfaidh Beekman tú ar do thuras taighde eolaíoch.
Hunan BKMAM Holding Co., Ltd
láithreán gréasáin: www.bkmbio.com
Ríomhphost:info@bkmbio.com